Loop-mediated isothermal amplification 缩写为LAMP， 环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)是一门新兴的基因扩增技术,作为一种分子生物学检测技术,具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及成本低的特点,已广泛用于临床疾病的诊断、流行性细菌或病毒的定性定量检测、动物胚胎性别鉴定及基因芯片开发等领域。
摘要：目的：分析沙门菌属LAMP在食品卫生检验中的应用效果。方法：择取2015年2月-11月的食品标本142份，通过LAMP以及分离培养法对其进行检测与鉴定，对比两组检测结果。结果：通过LAMP检测所得结果中，阳性率显著优于分类培养鉴定结果，数据差异存在统计学意义(P<0、05);应用LAMP进行检验，可以通过加荧光染料染色法判断结果;LAMP检测时间不超过24h，而分离培养鉴定时间在4d-7d左右。结论：应用LAMP法对食品进行检测，不仅具有较高的沙门菌属阳性率，而且检测周期较短，实际应用价值显著，值得广泛推广。
关键词：食品卫生检验 LAMP检测方法 应用效果 沙门菌属
沙门菌是诱发人体种类细菌性食物中毒的主要因素。现阶段，检测沙门菌的主要方法为分类培养法，该方法虽然具有较好的准确性，但操作程序十分繁琐，免疫学法并不具较好的敏感度，而PCR虽然具有较高的敏感度以及特异度，但在设备方面具有较高的要求，推广限制较大。LAMP属于新兴核酸扩增法，具有特异性强、快速以及简单等优势。本次试验主要通过对比分析分类培养法与LAMP法在食品沙门菌属方面的检测效果，进而探析LAMP法的应用价值。
一、资料与方法
1、一般资料
择取2015年2月-11月的食品标本142份，其中，有6分生食类蔬菜、8份鲜榨果汁、8份沙拉、10份冰激凌、10份生水产品、20份速冻米面、20份非发酵豆制品、20份熟肉、20份生鲜肉以及20份冷冻生肉。以肠炎沙门菌为参考菌株。
2、检测方法
取25g食品标本置于无菌均质袋内，以拍击式均质器进行拍打，2min后停止，将其置于37℃环境中培养10h，冷冻食品置于45℃环境中解冻15min。
对标本行分离培养法检测：在10mlTTB增菌液中接种1ml增菌后标本，然后置于42℃中对其进行培养，时长为24h。另在101mlSC增菌液中接种1ml增菌后标本，在37℃环境中培养4h。各取1杯增菌液，分别进行XLD平板与BS平板接种，于37℃环境中培养24h。择取3个可疑菌落，进行赖氨酸脱羧酶试验培养基、营养琼脂平板以及TSI接种，于37℃环境中培养24h。如果生化反应与沙门菌特征相符，取出营养琼脂平板中的可疑菌落，通过生理盐水，配制为菌悬液，然后通过微生物鉴定系统进行分析。如果XLD平板、BS平板中不存在可疑菌落，继续将BS平板置于37℃环境中培养24h，如检测仍不存在可疑菌落，则为阴性。
对标本进行LAMP检测：取1ml标本前增菌液，对其进行离心处理，离心率为每分钟10000r，共2min，排除上清提取核酸;另取上清液1l，制成DNA待检模板，对食品标本进行DNA检测，反应后，通过肉眼观察反应液颜色，如果呈现绿色，则为阳性;如果呈棕色，或是无色，则为阴性。
3、观察指标
观察两种检测方法的阳性率。
4、统计学方法
本次实验过程中，以SPSS19、0统计学软件对两种检测方法所涉及数据进行分析。其中计数的资料用n(%)表示，数据的组间比较以χ2进行检验;计量资料用均数±标准差(χ±s)表示，数据的.组间比较以T进行检验，P<0、05为统计学差异显著的判定标准。
二、结果
LAMP检测方法的阳性率为11、27%，分离培养法的阳性率为4、23%，数据组间比较差异明显，即P<0、05，详情见表1：
三、讨论
由各种类型沙门菌引发不同形式的野生禽兽、家畜以及人体感染，被统称为沙门菌病。带菌者，或是感染沙门菌人的粪便会在一定程度上污染食物，导致人体食物中毒。沙门菌极易导致人体发生细菌性食物中毒，主要表现有败血症、肠胃炎以及肠伤寒等，而且具有一定的传染性，可以通过消化道致病。LAMP检测法是新兴恒温核酸扩增法，根据靶基因所具有的6个区域，设计出来4种特异引物，通过特定链对DNA聚合酶进行置换处理，然后将其置于恒温条件下45min左右，促使其产生扩增反应。相对比PCR而言，LAMP在模板方面并不存在紫外观察、电泳、温度循环以及热变性等要求，不仅简单快捷，具有非常强的特异性，而且检测范围相对较大，检测灵敏度较好，在实际应用过程中，不需要借助特定仪器设备，便可以实现现场快捷且高通量检测，成本较低，经济性能显著。
细菌分离培养法操作程序较为复杂，检测速度比较缓慢，基本上，需要检测7d后，才能获取阳性结果，而且分离细菌后，还要UI器进行增菌与再分离培养，生化鉴定过程中繁琐，且成本较高，难以实现普及。LAMP可以直接提取前增菌液内的核酸，60min中便可以完成对其的扩增操作，沙门菌属检出时间不会超过24h，效率非常高。不仅如此，应用该方法可以通过肉眼直接观察检测结果，具有非常显著的直观价值与便捷性。
通过本次实验可知，LAMP检测法与分离培养法检测结果的阳性率差异非常显著，LAMP检测阳性率为11、27%，分离培养法检测的阳性率为4、23%，数据比较P<0、05，统计学意义显著。
四、结语
应用LAMP法对食品进行检测，不仅具有较高的沙门菌属阳性率，而且检测周期较短，实际应用价值显著，值得广泛推广。
